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當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 基孔肯雅熱試劑的試驗步驟

基孔肯雅熱試劑的試驗步驟點擊次數(shù):878 更新時間:2017-10-18

    基孔肯雅熱的特征是突然發(fā)熱,經(jīng)常伴有關(guān)節(jié)痛。其他常見癥狀還包括肌肉疼痛、頭痛、惡心、疲勞和皮疹。關(guān)節(jié)疼痛通常使患者極為虛弱,但往往持續(xù)數(shù)天或延長至數(shù)周。因此,該病毒可引起急性、亞急性或慢性疾病。在開始試驗前,請仔細(xì)閱讀試驗說明。結(jié)果的可信度是依賴于嚴(yán)格地按照實驗說明來進(jìn)行的,鋪板時zui少留1個孔為空白對照(A1)1個陰性質(zhì)控孔(B1)2個臨界質(zhì)控孔(C1+D1)1個陽性質(zhì)控孔(E1)。開始試驗前,請將所有試劑都平衡到室溫
    1.吸取50μL的質(zhì)控品和稀釋過的樣本到相應(yīng)的孔中,留A1孔做空白對照孔;
    2.封板;
    3.在37±1℃下孵育1小時±5分鐘;
    4.當(dāng)孵育完成時,揭去封板片,棄去反應(yīng)液,每孔300μL洗滌液,洗板3次,避免溢出。每孔浸泡的時間都必須>5秒,zui后拍板將殘留的液滴都拍去。
    5.吸取50μL基孔肯雅溶液1到除了空白對照孔的每個孔中,蓋板;
    6.在室溫孵育30分鐘;
    7.重復(fù)步驟4;
    8.將基孔肯雅溶液2跟鏈霉親和素結(jié)合物混勻10分鐘;
    9.吸取50μL基孔肯雅溶液2跟鏈霉親和素的復(fù)合物到除了空白對照孔的每個孔中,蓋板。
    10.室溫孵育30分鐘 ;
    11.重復(fù)步驟4;
    12.吸取100μLTMB底物液到每個孔中;
    13.避光孵育15分鐘();
    14.加入100μL終止液到每個孔中,與加TMB底物液時的間隔和順序都必須一樣;
    15.用酶標(biāo)儀在加入終止液后30分鐘內(nèi)與450/620nm處檢測。 
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