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【企業(yè)文化】

表面等離子共振法表面等離子共振（SPR）技術(shù)將 50 μmol/L核酸固定在親和素芯片上，再通入109 CFU/mL的靶標(biāo)細菌孵育 10min，然后用Biacore 3000測定。結(jié)果經(jīng)軟件分析后可求得Kd值。由于SPR可以直接檢測適配體與靶標(biāo)的結(jié)合狀態(tài)，因此無需額外對適配體進行修飾，最大限度地保持了適配體的空間結(jié)構(gòu)。5、DNA捕獲元件（DCE）法使用3’端帶有量子點或熒光基團標(biāo)記的適配體及5’端帶有猝滅基團的適配體的互補序列形成雙鏈DNA。加入靶標(biāo)后，因靶標(biāo)與適配體序列結(jié)合將釋放出5’端攜帶的猝滅基團的互補序列，而使適配體上的量子點或熒光基團發(fā)光。檢測熒光強度可定量檢測適配體-靶標(biāo)復(fù)合物的量。由于未與靶標(biāo)結(jié)合的適配體的熒光被猝滅，因而此方法的背景熒光低，具有較高的靈敏度。6、酶聯(lián)適配體分析法（ELISA）將5’端標(biāo)記有巰基的RNA適配體固定在銀膜上，經(jīng)磷酸鹽緩沖液（PBS）洗脫未固定的適配體后，加入靶標(biāo)細菌。孵育15min后靶標(biāo)被銀膜上的適配體捕獲固定，用PBS沖洗后，再加入帶有6-羥基熒光素（FAM）標(biāo)記的適配體繼續(xù)孵育，使其與靶標(biāo)形成適配體-細菌-適配體夾心型復(fù)合物，-洗脫未結(jié)合的適配體后，通過熒光成像即可觀察到帶有熒光的復(fù)合物，從而對靶標(biāo)細菌進行定量分析。采血工作由兩名實驗人員在負壓動物飼養(yǎng)箱中進行。小鼠采血采用斷尾或者摘眼球采血，豚鼠為心臟采血。采血后用棉球按住采血處止血。在負壓飼養(yǎng)箱內(nèi)將血液從注射器推入管口有棉球覆蓋的1.5ml螺口離心管內(nèi)，放入4℃冰箱使血清析出。將小型離心機放入生物安全柜內(nèi)，離心分離血清。將裝有血清的離心管放入65℃水浴加熱40分鐘，將血清中可能殘留的病原菌滅活。未用的血清樣品凍存于-70℃冰箱。（1）采血工作在負壓動物飼養(yǎng)箱中進行。

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