A群強(qiáng)凝集腦膜炎診斷血清

A群強(qiáng)凝集腦膜炎診斷血清

廣州健侖生物科技有限公司

【儲(chǔ)藏條件】

2~8℃避光保存，在標(biāo)明的有效期內(nèi)使用。

【有效期】

24個(gè)月

【產(chǎn)品名稱】

通用名：腦膜炎奈瑟菌診斷血清英文名：antisera for N.meningitidis

【產(chǎn)品說明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6個(gè)常見血清QUN（serogroup）腦膜炎奈瑟菌的血清群鑒定，將相應(yīng)血清群腦膜炎奈瑟菌制備滅活抗原，免疫家兔所得，血清產(chǎn)品經(jīng)免疫吸附去除了非特異性凝集成分，具有效價(jià)高，特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。

A群強(qiáng)凝集腦膜炎診斷血清

【規(guī)格】

每種血清群1瓶，每瓶2ml，均為使用液。

【使用方法】

1.產(chǎn)品在使用前，由冰箱拿出，恢復(fù)溫度到室溫后使用。

2.樣品分離培養(yǎng)物，經(jīng)鏡檢和生化鑒定，確定為腦膜炎奈瑟菌后，再進(jìn)行血清分群檢測(cè)，如果未能確定為腦膜炎奈瑟菌，不宜直接進(jìn)行血清凝集檢測(cè)，以免產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

3.待鑒定細(xì)菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培養(yǎng)48小時(shí)。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蠟筆或防水筆將玻璃片分為8個(gè)方格。

6. 在玻片每個(gè)方格的下半部分，用移液器加5%的福爾馬林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用無菌或一次性10μl接種環(huán)挑取BAP平板上過夜培養(yǎng)的細(xì)菌菌落。

8. 在玻片上將細(xì)菌與5%的福爾馬林溶液混勻，混勻后的液體應(yīng)該不透明，在加抗血清前應(yīng)保持細(xì)菌懸液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特異的抗血清，同時(shí)在陰性對(duì)照側(cè)加BS或者生理鹽水。

10. 緩慢的混合細(xì)菌懸液和抗血清，使上部的抗血清和下部的細(xì)菌懸液充分混合1-2分鐘。不要做旋轉(zhuǎn)晃動(dòng)，以免不同血清群的血清會(huì)相互混合污染。

11.在燈光下，黑暗背景條件下觀察結(jié)果。1-2分鐘內(nèi)呈2+及以上凝集現(xiàn)象為陽性，1-2分鐘內(nèi)呈現(xiàn)2+以下凝集現(xiàn)象為陰性。如果過了2分鐘，才發(fā)生的凝集反應(yīng)按陰性處理。

【凝集反應(yīng)的強(qiáng)度等級(jí)】

當(dāng)抗血清與細(xì)菌接觸，會(huì)引起凝集反應(yīng)，使細(xì)胞（細(xì)菌）凝集或呈簇，細(xì)胞（細(xì)菌）上清液變得清亮，細(xì)胞懸液濃度或使用的抗血清濃度不同，會(huì)產(chǎn)生不同的強(qiáng)度的凝集反應(yīng)，見圖示

4+ 所有的細(xì)胞都發(fā)生凝集，細(xì)胞懸液清亮。

3+ 75%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

2+ 50%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

1+ 25%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

+/- 少于25%的細(xì)胞發(fā)生凝集，可見有顆粒狀的成分。

0 沒有肉眼可見的凝集，上清懸液渾濁、平滑。

【血清群確定】

1. 1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或4+凝集為陽性反應(yīng)（強(qiáng)陽性反應(yīng)）。對(duì)于B群腦膜炎奈瑟菌來說，如果出現(xiàn)2+及以上的凝集則可認(rèn)為陽性。

2. 陰性反應(yīng)是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 當(dāng)菌株僅與一種抗血清出現(xiàn)凝集，但和生理鹽水不凝集時(shí)才能鑒定為該種血清型。

4. 如果不能確定血清群，菌株記為不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 關(guān)于不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理鹽水中凝集，無論與任何抗血清發(fā)生強(qiáng)反應(yīng)，都應(yīng)標(biāo)記為自凝菌。

7. 在生理鹽水中不自凝，和多種血清出現(xiàn)凝集，記為NG。

8. 不和生理鹽水凝集，也不和任何一個(gè)血清凝集也記作NG。

【結(jié)果難以判斷時(shí)解決方案】

腦膜炎奈瑟菌具有可變性（有莢膜與無莢膜，小菌落與大菌落，慢生長與快生長，強(qiáng)凝集與弱凝集），有時(shí)候很難清除解釋結(jié)果，一些建議如下：

1. 挑取同一平板上的另一個(gè)細(xì)菌克隆進(jìn)行重復(fù)凝集試驗(yàn)。

2. 如果玻片上的結(jié)果不明確，將試管中配置懸液，重復(fù)該試驗(yàn)。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一環(huán)細(xì)菌進(jìn)行混均凝集。

4. 再次培養(yǎng)，第二天進(jìn)行重新試驗(yàn)。

5. 如果當(dāng)天的平板上有各種大小不一的菌落，每種菌落再次分離純培養(yǎng)，第二天每種菌落進(jìn)行試驗(yàn)。大菌落一般會(huì)有比較好的凝集反應(yīng)，小菌落次之。

6. 如果試驗(yàn)中的問題還是不能解決，應(yīng)當(dāng)和對(duì)照菌株同時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)，確保試劑的正確性。

【血清質(zhì)量控制】

在對(duì)未知的菌落進(jìn)行血清分群之前，應(yīng)選用一套腦膜炎奈瑟菌參考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的腦膜炎奈瑟菌進(jìn)行質(zhì)量控制檢測(cè)。操作步驟：

1. 新購進(jìn)的每一批次抗血清要用參考菌株進(jìn)行檢測(cè)。

2. 半年后重復(fù)質(zhì)量控制檢測(cè)

3. 如果血清管暴露于超過4℃環(huán)境，或者懷疑血清被污染時(shí)，也要對(duì)血清進(jìn)行重新的質(zhì)量控制。

4. 關(guān)于血清分群和質(zhì)量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的參考菌株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，記錄質(zhì)量控制驗(yàn)證結(jié)果。

【血清質(zhì)量控制檢測(cè)結(jié)果判讀】

1. 通過質(zhì)量控制檢測(cè)

與同源性的抗原反應(yīng)，1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或 4+程度的凝集；單一血清群的抗血清不與其他血清群的腦膜炎奈瑟菌反應(yīng)，不與NG菌株凝集反應(yīng)，鹽水不自凝。

2. 分群血清質(zhì)量控制檢測(cè)失敗

如果抗血清與一種或多種參考菌株凝集反應(yīng)，或/和NG參考菌株反應(yīng)，鹽水自凝，則血清不能使用。

【其他所需材料】

潔凈玻片、生理鹽水（0.85%的氯化鈉溶液）、5%的福爾馬林溶液、接種環(huán)或移液器。

【注意事項(xiàng)】

1. 本產(chǎn)品只能作為腦膜炎奈瑟菌血清型判定的輔助方法，zui終的判定需形態(tài)學(xué)、生化方法和血清學(xué)方法共同進(jìn)行。

 2. 本產(chǎn)品應(yīng)避免冷凍。反復(fù)凍融會(huì)使血清產(chǎn)生沉淀。

3. 本產(chǎn)品在保存過程中可能會(huì)產(chǎn)生渾濁或沉淀，這并不表示該產(chǎn)品已被污染。離心或者過膜去掉渾濁或沉淀后，可以正常使用。

4. 本產(chǎn)品含有0.1%*作為防腐劑，丟棄時(shí)需倒入下水管，并用大量的水沖洗下水管。

廣州健侖生物公司提供SSI血清產(chǎn)品，包括沙門氏菌，志賀氏菌，大腸桿菌，肺炎鏈球菌，嗜血桿菌等。并且提供德國有名血清品牌SiFin的核心血清產(chǎn)品，德國SiFin血清質(zhì)量好，實(shí)驗(yàn)*，已被各高校實(shí)驗(yàn)室，研究所列為推薦血清產(chǎn)品！詳情可咨詢工作人員！

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一般是將被檢材料接種于兩個(gè)同樣的選擇培養(yǎng)基（每100毫升基礎(chǔ)

培養(yǎng)基，如血清葡萄糖瓊脂、血清馬鈴薯浸液瓊脂、胰酶消化蛋

白胨瓊脂、血清馬丁湯瓊脂中加入抑菌藥物：細(xì)菌菌酮10毫克，

桿菌肽25單位，多粘菌素（B6單位）平板，一個(gè)置10%二氧化碳（

CO2）環(huán)境37℃培養(yǎng)，一個(gè)置普通溫箱37℃培養(yǎng)，逐日觀察，通常

在3-10天可出現(xiàn)生長，然后移植于血清葡萄糖瓊脂純化。如符合

下述全部條件，可認(rèn)為是布氏桿菌屬的細(xì)菌：細(xì)小的革蘭氏陰性

球桿菌，無芽胞、莢膜和鞭毛，不運(yùn)動(dòng)，需氧，接觸酶陽性，糖

發(fā)酵，甲基紅試驗(yàn)（MR），維培試驗(yàn)（VP），吲哚、檸檬酸鹽利

用等反應(yīng)均為陰性，光滑型菌落能與布氏桿菌陽性血清凝集，粗

糙型菌落能與布氏桿菌R血清凝集。

在治療上，大多數(shù)革蘭氏陽性菌都對(duì)青霉素敏感（結(jié)核桿菌對(duì)青

霉素不敏感）；而革蘭氏陰性菌則對(duì)青霉素不敏感（但奈瑟氏菌

中的流行性腦膜炎雙球菌和淋病雙球菌對(duì)青霉素敏感），而對(duì)鏈

霉素、氯霉素等敏感。所以首先區(qū)分病原菌是革蘭氏陽性菌還是

陰性菌，在選擇抗生素方面意義重大。
革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁較厚，約20～80nm。肽聚糖含量豐富，有15

～50層，每層厚度1nm,約占細(xì)胞干重的50～80%。此外，尚有大

量特殊組份磷壁酸(teichoic acid)。磷壁酸是由核糖醇

(ribitol)或甘油(glycerol)殘基經(jīng)由磷酸二鍵互相連接而成的

多聚物。磷壁酸分壁磷壁酸(wall teichoic acid)和膜磷壁酸

(membrane teichoic acid)兩種，前者和細(xì)胞壁中肽聚糖的n-

乙酰胞壁酸連結(jié)，膜磷壁酸又稱脂磷壁酸(lipteichoic acid)和

細(xì)胞膜連結(jié)，另一端均游離于細(xì)胞壁外。磷壁酸抗原性很強(qiáng)，是

革蘭氏陽性菌的重要表面抗原；在調(diào)節(jié)離子通過粘肽層中起作用

；也可能與某些酶的活性有關(guān)；某些細(xì)菌的磷壁酸，能粘附在人

類細(xì)胞表面，其作用類似菌毛，可能與致病性有關(guān)。此外，某些

革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁表面還有一些特殊的表面蛋白，如a蛋白等，

都與致病有關(guān)。
The seeding material is generally seeded on two identical selection media (per 100 ml basis

Media such as serum glucose agar, serum potato agar, and tryptic digestion of eggs

Peanut agar, serum martin soup agar antibacterial drugs added: bacterial ketone ketone 10 mg,

Bacitracin 25 units, polymyxin (B6 unit) plates, one set of 10% carbon dioxide (

CO2) environment 37 ℃ culture, a common incubator 37 ℃ culture, daily observation, usually

Growth can occur between 3-10 days and then transplanted onto serum dextrose agar for purification. If consistent

All of the following conditions are considered to be bacteria of the genus Brucella: small, gram-negative

Coccobacillus, spore-free, capsular and flagellar, not motile, aerobic, contact-positive, sugar

Fermentation, Methyl red test (MR), Viter's test (VP), Indole, Citrate

With other reactions were negative, smooth colonies with brucella positive serum agglutination, crude

Rough colonies with Brucella R agglutination.

In therapy, most Gram-positive bacteria are susceptible to penicillin (Mycobacterium tuberculosis is green

Not sensitive to penicillin); Gram-negative bacteria are insensitive to penicillin (but Neisseria

Epidemic meningococcus and N. gonorrhoeae are susceptible to penicillin), while on the chain

Mycin, chloramphenicol and other sensitive. So first of all to distinguish the pathogen is gram-positive bacteria or

Negative bacteria, significant in the selection of antibiotics.
Gram-positive bacteria cell wall thicker, about 20 ~ 80nm. Peptidoglycan is abundant, 15%

~ 50 layers, each layer thickness of 1nm, accounting for about 50 to 80% of cell dry weight. In addition, there are still big

A special component of teichoic acid. The teichoic acid is made from ribitol

(ribitol) or glycerol residues are linked to each other via a phosphate bond

Polymers. Wall teichoic acid and membrane teichoic acid

(membrane teichoic acid) two, the former and cell wall peptidoglycan n-

Acetyl cell wall acid linkages, membrane teichoic acid, also known as lipoteichoic acid (lipteichoic acid) and

Cell membrane link, the other end are free from the cell wall. Ticinogenic antigenic strong, yes

An important surface antigen of Gram-positive bacteria; plays a role in regulating ions through the muco-peptide layer

; May also be related to the activity of certain enzymes; some bacterial teichoic acid, can adhere to humans

Similar cell surface, its role is similar to pili, may be related to pathogenicity. In addition, some

Gram-positive bacteria cell wall surface there are some special surface proteins, such as a protein, etc.,

Are related to the disease.